德國蔡司掃描電鏡是一種利用電子進行成像的顯微鏡,掃描電鏡具有比光學(xué)顯微鏡高得多圖像分辨率,使我們擁有在亞原子尺度上觀察微觀世界的能力。 德國蔡司掃描電鏡濺射噴金的樣品制備技術(shù)可用于提高圖像的質(zhì)量和分辨率。由于其優(yōu)良的高導(dǎo)電性,在成像時,濺射材料可以增加信噪比,從而獲得更好的成像質(zhì)量。
使用掃描電鏡噴金前需要噴金的一類樣品是電子束敏感樣品。這類樣品主要是生物樣品,但也可能是其他種類,例如塑料材料。噴金中的電子束具有較高能量,在與樣品的相互作用過程中,它以熱的形式將部分能量傳遞給樣品。
干燥是德國蔡司掃描電鏡生物樣品制備中的關(guān)鍵環(huán)節(jié),如果處理不好,會直接影響到觀察的清晰度與準(zhǔn)確度。要想制備出好的掃描電鏡生物樣品,需要在干燥過程中盡可能減少由于水分蒸發(fā)而引起的樣品表面形貌的形變,且必須確保干燥。大多數(shù)動植物容易發(fā)生明顯的塌陷和變形。因此,需要針對不同的生物樣品來選擇合適的干燥方法。
1.自然干燥法
自然干燥法是指樣品中的水分在大氣中自然蒸發(fā),或樣品經(jīng)脫水處理后脫水劑自然揮發(fā)而干燥的方法。
對干種子、果殼、某些干花粉、昆蟲標(biāo)本等來說,自然干燥法是一個簡易實用有效的方法,雖然在自然干燥過程中,樣品體積有所收縮,但卻保留了樣品的基本形態(tài)。適用于外表堅硬的樣品,如外表有殼的昆蟲,木材等。
2.烘干干燥法
烘干干燥法是將要研究的樣品用烘干箱烘干,一般溫度控制在80℃以下,烘干程度以含水量在5%以下為好。此方法的干燥速度較快,但水分蒸發(fā)時可能造成樣品變形或斷裂。適用于不易變形且耐熱的樣品,比如淀粉粒、孢子粉等。
3.臨界點干燥法
臨界點干燥法是利用物質(zhì)在臨界狀態(tài)下,液體和氣體的密度相等,氣液界面消失,液體的表面張力系數(shù)為零。臨界點干燥法之所以一直被視為制作生物醫(yī)學(xué)掃描樣品可靠的干燥方法,是因為此法能消除液體表面張力的作用,干燥出的樣品能zui大程度地保存其自然形態(tài)。
4.冷凍干燥法
冷凍干燥法是將含水樣品放入低溫環(huán)境中冷凍,或使用溶劑將樣品中的水逐級替換后冷凍,然后抽真空升華。它是利用低溫和真空,使樣品中的水分或溶劑直接升華,以達到干燥樣品的目的。冷凍干燥過程不經(jīng)過液相階段,因而避免了氣相和液相之間表面張力對樣品的損傷。
5.真空干燥法
真空干燥法指的是將經(jīng)脫水(多用梯度脫水)的樣品置于真空容器中進行干燥的方法。真空干燥法選用高熔點的有機溶劑作升華介質(zhì),既保留了冷凍干燥法的優(yōu)點,又不用對樣品進行冷凍處理,無冷凍損傷,且操作簡單。適用于所有生物樣品,特別是細菌、細胞等微小樣品。